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产品详情
单管便捷大片段鼠DNA提取试剂盒说明书
产品概述
本试剂盒采用独特的Buffer体系，可以有效去除影响下游小鼠基因型鉴定的PCR抑制因子，仅需0.5~1 mg的微量鼠尾组织即可从幼年或成年小鼠鼠尾中提取到10~20 μg高质量、高纯度基因组DNA，最大程度减少了剪取鼠尾对小鼠造成的损伤。提取的基因组DNA可以直接PCR扩增，且对Taq酶的兼容性强。
产品组成
产品特点
1、减少小鼠损伤：仅需剪取0.5~1 mg的微量鼠尾组织。
2、时间短：可在30~60 min内完成大批量样品的基因组DNA提取。
3、单管提取：减少耗材资源浪费和提取工作量，有效降低交叉污染风险。
4、高效便捷：三步完成提取，无需全程操作。
5、长片段扩增：目的扩增片段长度大于5 kb，长片段扩增友好。
产品储存与有效期
1、小鼠组织Buffer solution II应置于－20℃单独储存。
2、其他试剂与物品储存于常温（0~30℃），可在两年内保持使用性能无明显变化。
操作流程
一、物料准备
手术剪、小鼠组织Buffer solution I、小鼠组织Buffer solution II、小鼠组织DNA清洁珠、1.5 mL EP管、小鼠组织（鼠尾/鼠爪/鼠耳）。
二、操作细节
1、用手术剪剪取0.5~1 mg的小鼠组织，转移组织到一个1.5 mL EP管中（如图1）。
图1
2、加入196 μL的Buffer solution I，再加入4 μL的Buffer solution II，55℃消化4小时（如图2~4）。
注：如果消化4小时后发现仍有不可溶解的组织颗粒存在，可过夜消化直至组织全部溶解。
3、无需更换EP管，向消化液中加入40 μL的小鼠组织DNA清洁珠，充分混匀后冰上或4℃冰箱静置30~60分钟（如图5~7）。
注：
① DNA清洁珠使用前必须摇匀。
②若要获得更好的提取效果，静置时间可适当延长。
4、15000 rpm离心5分钟，EP管内的上清液即为高质量的小鼠基因组DNA提取液（如图8和图9）。
操作流程图示
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注意事项
DNA清洁珠使用前必须摇匀。
请勿直接接触Buffer solution I，操作时应戴好乳胶手套，避免沾染皮肤。
离心步骤在低温（4℃）或室温下进行均可（15~25℃）。
常见问题
1、鼠尾消化不完全
如果消化4小时后发现鼠尾还有肉眼可见的不溶解组织颗粒，可以延长消化时间或过夜消化，直至鼠尾完全消化。
2、离心后上清液仍有少量活性炭悬浮
- 无需处理，不影响后续PCR反应。
3、PCR 产物少或没有目的条带
- 如果鼠尾消化液中的PCR抑制因子较多，DNA清洁珠作用发挥不完全，可能会对PCR反应产生抑制，导致结果无目的条带，建议在加入DNA清洁珠后将低温静置时间延长至4小时以上，以彻底去除鼠尾消化液中的PCR抑制因子。
- 由于本产品提取的基因组DNA纯度和浓度高，如果PCR反应体系中DNA模板量过高，也会导致PCR反应异常，建议将提取出的DNA溶液稀释，或减少PCR反应体系中的DNA模板量，可以有效改善PCR结果。
- 如果扩增序列结构复杂，例如GC含 量偏高、偏低，或存在重复序列等，均会造成PCR扩增困难，建议在PCR体系中添加少量的DMSO或Mg2+，帮助降低复杂序列的PCR扩增难度。
动物房剪爪/剪尾操作流程
一、物料准备
眼科剪、75%酒精浸泡的酒精棉、1.5 mL EP管或96孔板
二、操作细节
1、用消毒液和清水分别擦拭一遍操作台台面后，将剪爪/剪尾所需的眼科剪、酒精棉、1.5 mL EP管或96孔板经消毒液喷雾放入操作台备用（如图1和图2所示）
2、剪爪时操作台中只操作一盒小鼠，取下水瓶，双手蘸取消毒液消毒后打开笼盒
3、剪爪之前先小鼠雌雄分开把雌雄小鼠区分开，分性别进行剪爪（如图3所示）
图3
4、双手沾取消毒液，充分消毒手部，依次抓取小鼠，使用酒精消毒后的眼科直剪剪爪，剪爪的长度为一个指节长度（2~3 mm），剪尾的长度为尾尖部2~3 mm（如图4和图5所示）
5、将剪下的鼠爪/鼠尾样品放入1.5 mL EP管管内/96孔板对应孔位内（如图6所示）
图6
6、盖好管盖，并在管盖或管壁上写明小鼠相关信息（如图7图8所示）
三、注意事项：
1、脚趾编号规则
① 小鼠腹部朝上进行剪爪或者读数，如下图所示：
② 编号剪爪的数字可以为1-99，成百数字默认不剪爪或者不识别（例如：100，200，1300………），每个爪子对应读数如图一。
③ 每个品系/项目从1开始编号一直往下编，编号至5000号以后重启为1，每次剪爪前需要确认上次编号的最后一个数字。
2、如果笼盒内已经比较脏时，剪爪后需要进行换笼。
3、每剪一只小鼠都需要用酒精棉球进行剪刀消毒，防止基因污染或者笼盒间健康污染。
4、剪爪用的眼科直剪，平时保存在实验器械盒中，每周进行高压，每次使用前后用酒精进行消毒。